Page 49 - Memoria digital Congreso Internacional en Salud Publica y Desastres 2014

Universidad Autónoma de Chiapas Congreso Internacional en Salud Pública y Desastres y 2014. Se extrajo el DNA total a partir de las muestras de sangre periferica, empleando la técnica estándar de lisis celular con TSNT y extracción con fenol-cloroformo. La identifcación del SNP rs2975760 se realizó empleando la técnica Tetraprimer ARM – PCR, empleando oligonucleótidos diseñados con el algoritmo BatchPrimer3, y verifcados con los softwares Amplify 3.1 y BLASTN. La secuencia de los oligonucleótidos empleados son los siguientes: F: CATCCCAAGGGCTGTTTTAG, R: GCCTCAATCCCACCTCTTTA, FI: CGCTCACGCTTGCAGC, RI: ACCTTCAAACGCCTTACTACA. El tamaño de los amplicones que se obtienen con los oligonucleótidos son: F + R de 250 pb (control interno), F + RI de 182 pb (alelo C: Pro), FI + R de 104 (alelo T). La reacción de PCR se preparó en un volumen de 15 µl con una concentración fnal compuesta por Bufer 1X, MgCl2 1.5 mM, dNTP’s 0.2 µM, oligonucleótidos F, R y RI a 0.33 µM, oligonucleótido FI a 0.33 µM, GoTaq Flexi DNA polimerasa 0.33 U/µl y 50-100 ng de DNA genómico. El programa de amplifcación fue de 5 minutos a 95ºC como etapa pre-PCR, seguido por 40 ciclos de 20s a 95ºC, 20s a 45ºC y 30s a 72ºC, y una etapa de extensión fnal de 5 minutos a 72ºC. Los amplicones obtenidos fueron separados por electroforesis en geles de agarosa al 3% en bufer TAE 1X a 100 Volts durante 40 minutos; posteriormente el gel se tiñó con bromuro de etidio y los resultados se visualizaron por exposición a la luz UV. Resultados En el Cuadro 1 se muestran las características demográfcas y clínicas de la población de estudio, en la que se observa que los sujetos diabéticos sufren de sobrepeso u obesidad. Los sujetos control no presentan sobrepeso u obesidad ni valores elevados de glucosa sérica, pues fueron criterios de exclusión. En la Figura 1 se muestra un ejemplo de los resultados de genotipifcación del SNP rs2975760 del gen CAPN10. En el cuadro 2 se muestra la frecuencia alélica y genotípica del SNP rs2975760 del gen CAPN10, en los que al comparar estadísticamente entre los sujetos diabéticos y el grupo control, se obtuvo un valor de p=0.0238 para los portadores del alelo C y un OR de 0.691 (0.45 – 1.054). Se obtuvo un valor de la prueba EHW de X =0.3182 y p=0.5726. 2 Publicación anual Tuxtla Gutiérrez • Chiapas • México 49